Nick çevirisi - Nick translation

Nick çevirisi^[1] (veya baş çevirisi), 1977'de Peter Rigby ve Paul Berg tarafından geliştirilen bir etiketleme teknik moleküler Biyoloji içinde DNA Polimeraz I bazı nükleotidlerin yerini almak için kullanılır DNA etiketlenmiş analogları ile dizi, bir prob olarak kullanılabilecek etiketli bir DNA dizisi oluşturur. floresan yerinde hibridizasyon (BALIK) veya lekeleme teknikleri. Şunlar için de kullanılabilir radyo etiketleme.^[2]

Bu işleme nick çevirisi denir çünkü işlenecek DNA, tek sarmallı "çentikler" üretmek için DNAaz ile işlenir. Bunu, takma sitelerin yerine DNA polimeraz I, uzatan 3 'hidroksil terminali, nükleotidleri 5'-3 'eksonükleaz aktivitesi ile uzaklaştırarak, bunların yerine dNTP'ler. Blotlama prosedürlerinde bir prob olarak kullanılmak üzere bir DNA fragmanını radyoaktif olarak etiketlemek için, reaksiyonda sağlanan birleşik nükleotidlerden biri, alfa fosfat konumu. Benzer şekilde, floresan etiketleme yerine bir florofor veya immün algılama için bir antijen eklenebilir. DNA polimeraz I sonunda DNA'dan ayrıldığında, fosfat omurgasında başka bir çentik bırakır. Takma, şuna bağlı olarak bir mesafeyi "tercüme etmiştir" işlenebilirlik polimeraz. Bu çentik mühürlenebilir DNA ligaz veya 3 'hidroksil grubu, diğer DNA polimeraz I aktivitesi için şablon olarak hizmet edebilir. Prosedürdeki tüm adımları tek bir inkübasyonda gerçekleştirmek için tescilli enzim karışımları ticari olarak mevcuttur.

Nick translasyonu, eğer DNA polimeraz I zıt iplik üzerinde başka bir çentikle karşılaşırsa, iki daha kısa fragmanla sonuçlanırsa, çift sarmallı DNA kırılmalarına neden olabilir. Bu, yerinde hibridizasyonda etiketli probun performansını etkilemez.

Referanslar

^ Rigby PW, Dieckmann M, Rhodes C, Berg P (Haziran 1977). "DNA polimeraz I ile nick translasyonu yoluyla deoksiribonükleik asidin in vitro yüksek spesifik aktiviteye etiketlenmesi". J. Mol. Biol. 113 (1): 237–51. doi:10.1016/0022-2836(77)90052-3. PMID 881736.
^ Mathew CG (1985). "Nick çevirisi ile DNA'nın radyo-etiketlenmesi". Nükleik asitler. Yöntemler Mol. Biol. 2. s. 257–61. doi:10.1385/0-89603-064-4:257. ISBN 0-89603-064-4. PMID 21374202.

Bu genetik makale bir Taslak. Wikipedia'ya şu yolla yardım edebilirsiniz: genişletmek.

[1] Rigby PW, Dieckmann M, Rhodes C, Berg P (Haziran 1977). "DNA polimeraz I ile nick translasyonu yoluyla deoksiribonükleik asidin in vitro yüksek spesifik aktiviteye etiketlenmesi". J. Mol. Biol. 113 (1): 237–51. doi:10.1016/0022-2836(77)90052-3. PMID 881736.

[2] Mathew CG (1985). "Nick çevirisi ile DNA'nın radyo-etiketlenmesi". Nükleik asitler. Yöntemler Mol. Biol. 2. s. 257–61. doi:10.1385/0-89603-064-4:257. ISBN 0-89603-064-4. PMID 21374202.

[1]

[2]