Restriksiyon enzim aracılı entegrasyon - Restriction enzyme mediated integration

Restriksiyon enzim aracılı entegrasyon (olarak kısaltılır REMI) entegre etmek için bir tekniktir DNA (doğrusallaştırılmış plazmid ) aynı tarafından üretilen genom sitelerine Kısıtlama enzimi DNA doğrusallaştırması için kullanılır.[1] Plazmid entegrasyonu, genetik şifre genellikle tanıma bölgelerini plazmit doğrusallaştırması için kullanılan sınırlama enzimi ile yeniden oluşturarak.

Mekanizma

Spesifik kısıtlama enzimi, genomik DNA'yı rastgele noktalarda parçalar ve tanıma siteleri oluşturur.[2] Eklenecek DNA parçası, söz konusu aynı kısıtlama enzimi ve hücreye enjekte edilen karışım kullanılarak doğrusallaştırılır ve ardından bir DNA parçasının başarılı bir şekilde yerleştirilmesi sağlanır.[3]

Başvurular

REMI yöntemi, genetiği değiştirilmiş Organizmalar I dahil ederek Saccharomyces cerevisiae, Dictyostelium discoideum ve Xenopus laevis.[1][4][5]

Genom mühendisliği

REMI, büyük ölçekli transgenez içinde X. laevis embriyolar dahil olmak üzere çeşitli sinyal yollarını incelemek için FGF ve Tiroid sistemi.[3][6]

Referanslar

  1. ^ a b Schiestl, R. H .; Petes, T. D. (1991-09-01). "Saccharomyces cerevisiae'de yasal olmayan rekombinasyon yoluyla DNA fragmanlarının entegrasyonu". Amerika Birleşik Devletleri Ulusal Bilimler Akademisi Bildirileri. 88 (17): 7585–7589. doi:10.1073 / pnas.88.17.7585. ISSN  0027-8424. PMC  52346. PMID  1881899.
  2. ^ Kessler, C .; Manta, V. (1990-08-16). "Kısıtlama endonükleazlarının özgüllüğü ve DNA modifikasyonu metiltransferazlar bir inceleme (Baskı 3)". Gen. 92 (1–2): 1–248. doi:10.1016 / 0378-1119 (90) 90486-b. ISSN  0378-1119. PMID  2172084.
  3. ^ a b Kroll, K. L .; Amaya, E. (1996-10-01). "Sperm nükleer transplantasyonlarından elde edilen transgenik Xenopus embriyoları, gastrulasyon sırasında FGF sinyal gereksinimlerini ortaya koymaktadır". Geliştirme. 122 (10): 3173–3183. ISSN  0950-1991. PMID  8898230.
  4. ^ Kuspa, A .; Loomis, W. F. (1992-09-15). "Dictyostelium'daki gelişimsel genleri, plazmid DNA'nın restriksiyon enzim aracılı entegrasyonu ile etiketleme". Amerika Birleşik Devletleri Ulusal Bilimler Akademisi Bildirileri. 89 (18): 8803–8807. doi:10.1073 / pnas.89.18.8803. ISSN  0027-8424. PMC  50009. PMID  1326764.
  5. ^ Serçe, Duncan B .; Latinkic, Branko; Mohun, Tim J. (2000-02-15). "Transgenik Xenopus oluşturmanın basitleştirilmiş bir yöntemi". Nükleik Asit Araştırması. 28 (4): e12. doi:10.1093 / nar / 28.4.e12. ISSN  0305-1048. PMC  102591. PMID  10648800.
  6. ^ Turque, Nathalie; Palmier, Karima; Le Mével, Sébastien; Alliot, Caroline; Demeneix, Barbara A. (2005-11-01). "Premetamorfik Ksenopus Kurbağa Yavrularında Tiroid Bozucu Ajanların Transkripsiyonel Etkilerini Test Etmek İçin Hızlı, Fizyolojik Bir Protokol". Çevre Sağlığı Perspektifleri. 113 (11): 1588–1593. doi:10.1289 / ehp.7992. ISSN  0091-6765. PMC  1310923. PMID  16263516.