Geçici ifade - Transient expression

Geçici ifade, daha sık "geçici gen ifadesi", geçicidir genlerin ifadesi kısa bir süre sonra ifade edilen nükleik asit, en sık plazmid DNA bir ifade kasetinin kodlanması, ökaryotik hücreler. Geçici gen ifadelerinin çoğu kültürlenmiş hayvan hücreleri ile yapılır. Teknik ayrıca bitki hücrelerinde de kullanılır; ancak nükleik asitlerin bu hücrelere transferi, hayvan hücreli olanlardan farklı yöntemler gerektirir. Hem bitkilerde hem de hayvanlarda, geçici ekspresyon, transfer edilen nükleik asitlerin zamanla sınırlı kullanımı ile sonuçlanmalıdır, çünkü herhangi bir uzun vadeli ekspresyon "kararlı ekspresyon" olarak adlandırılacaktır.

Metodoloji, dönüşecek organizmaya bağlı olarak değişir. Süre bitkiler içine sokulan bir yapı ile dönüştürülebilir Agrobacterium tumefaciens agroinfiltration yoluyla veya çiçek daldırma çoğu hayvan hücresinin viral vektör.

Biraz mantarlar, sevmek mayalar veya zygomycota duyarlı dönüşüm farklılaştırarak hif -e protoplastlar ve Cl2Ca 10–50 mM ekleyerek, Tris -HCl 10 mM, polietilen glikol (% 40) ve DNA yapısı (> 5 µg / ml) 10 ^ 8 protoplast / ml solüsyonuna. Bu pH koşulları altında, PEG bir bağlayıcı protoplastların bir araya toplanmasını ve tanıtılan DNA ipliklerini yakalamasını teşvik eder. Bu işlem, ökaryotik hücrelerin bol miktarda olmasına rağmen nispeten yüksek bir verime sahiptir. eksonükleazlar eksojen DNA'yı bozan.

Referanslar

Dış bağlantılar

  • Canto, Tomas (2016). "Bitkilerde Geçici İfade Sistemleri: Potansiyeller ve Kısıtlamalar". Deneysel Tıp ve Biyolojideki Gelişmeler. 896: 287–301. doi:10.1007/978-3-319-27216-0_18. hdl:10261/135535. ISBN  978-3-319-27214-6. ISSN  0065-2598. PMID  27165332.
  • Grimsley, N .; Hohn, B .; Hohn, T .; Walden, R. (Mayıs 1986). ""Agroinfection, "Ti plazmidi kullanarak bitkilerin viral enfeksiyonu için alternatif bir yol". Amerika Birleşik Devletleri Ulusal Bilimler Akademisi Bildirileri. 83 (10): 3282–3286. doi:10.1073 / pnas.83.10.3282. ISSN  0027-8424. PMC  323497. PMID  16593697.
  • Patrick, Marcy. "Plazmidler 101: Maya Vektörleri". blog.addgene.org.
  • "Geçici ve Kararlı İfade". www.genscript.com.