Phagemid - Phagemid - Wikipedia

Bir fajmid veya fazmid bir DNA tabanlı klonlama vektörü ikisine de sahip bakteriyofaj ve plazmid özellikleri.[1] Bu vektörler, plazmid replikasyonunun kökenine ek olarak bir çoğaltmanın kökeni bakteriyofajdan türetilmiştir. Yaygın olarak kullanılan plazmidlerin aksine, fajmid vektörleri, kapsid bir bakteriyofajın, paketleme için sinyal veren genetik bir diziye sahip olmaları nedeniyle. Fajmidler, çeşitli biyoteknoloji uygulamalarında kullanılır; örneğin, "moleküler biyoloji" adlı bir teknikte kullanılabilirler.Faj Gösterimi ".[2]

Klonlama vektörünün özellikleri

Bir fajmid bir plazmid f1 içeren çoğaltmanın kökeni bir f1 fajı.[3] Bir tür olarak kullanılabilir klonlama vektör ile bütünlüğünde ipliksi faj M13. Bir fajmid, bir plazmid olarak kopyalanabilir ve ayrıca tek sarmallı olarak paketlenebilir. DNA viral partiküllerde. Phagemidler bir çoğaltmanın kökeni (ori) çift ​​sarmallı çoğaltma için ve ayrıca tek sarmallı çoğaltma ve faj partiküllerine paketlemeyi mümkün kılan bir f1 ori.[3] Yaygın olarak kullanılan birçok plazmit, bir fi ori içerir ve bu nedenle fajmidlerdir.

Bir plazmide benzer şekilde, bir fajmid, DNA fragmanlarını klonlamak için kullanılabilir ve bir bakteri konakçıya, örneğin dönüşüm ve elektroporasyon. Bununla birlikte, bir fajmid içeren bir bakteriyel konakçının bir "yardımcı" faj ile enfeksiyonu, örneğin VCSM13 veya M13K07, fajmid DNA'nın faj partiküllerine tek iplikli DNA replikasyonunu ve paketlenmesini sağlamak için gerekli viral bileşenleri sağlar. "Yardımcı" faj, önce konakçı hücrenin pilusuna bağlanarak ve daha sonra eklendikten sonra faj genomunu konakçı hücrenin sitoplazmasına taşıyarak bakteriyel konağa bulaşır. Hücrenin içinde, faj genomu, sitoplazmada tek sarmallı fajmid DNA üretimini tetikler. Bu fajmid DNA daha sonra faj partiküllerine paketlenir. SsDNA içeren faj partikülleri, bakteriyel konakçı hücreden hücre dışı ortama salınır.

İpliksi fajlar bakteriyel büyümeyi geciktirir, ancak lambda fajı ve T7 fajı, genellikle değil litik. Yardımcı fajlar genellikle daha az verimli bir şekilde paketlenecek şekilde tasarlanmıştır (kusurlu bir faj replikasyon kaynağı yoluyla)[4] sonuçta ortaya çıkan faj parçacıkları ağırlıklı olarak fajmid DNA içerecek şekilde fajmidden daha fazla. F1 Filamentli faj enfeksiyonu, pilus bu nedenle yalnızca F-plazmid veya türevleri, faj partikülleri oluşturmak için kullanılabilir.

Döngü dizilemesinin geliştirilmesinden önce, dizileme amaçları için tek sarmallı DNA şablonu oluşturmak için fajmidler kullanıldı. Günümüzde fajmidler için şablonlar oluşturmak için hala kullanışlıdır Bölgeye yönelik mutagenez. İpliksi faj yaşam döngüsünün ve yapısal özelliklerin ayrıntılı karakterizasyonu, faj gösterimi bir dizi peptit ve proteinin faj kaplama proteinlerine füzyonlar olarak ifade edilebildiği ve viral yüzeyde görüntülenebildiği teknoloji. Gösterilen peptidler ve polipeptidler, faj partikülü içindeki karşılık gelen kodlayıcı DNA ile ilişkilidir ve bu nedenle bu teknik, protein-protein etkileşimleri ve diğer ligand / reseptör kombinasyonları.

Referanslar

  1. ^ Wilson, K .; Walker, J. (2010). Biyokimya ve Moleküler Biyolojinin İlke ve Teknikleri. 7. baskı. New York: Cambridge University Press. s. 751.
  2. ^ Barbas, C. F .; Burton, D. R .; Silverman, G.J. (2001). Faj Görüntüleme: Bir Laboratuvar Kılavuzu. New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press. s. 736.
  3. ^ a b Genlerin ve Genomların Analizi, John Wiley & Sons, 2004, S. 140, Google Kitapları
  4. ^ Lund, Paul E .; Hunt, Ryan C .; Gottesman, Michael M .; Kimchi-Sarfaty, Chava (2010). "SiRNA'nın Teslim Edilmesi için Araçlar Olarak Sahte Virüsler". Farmasötik Araştırma. 27 (3): 400–420. doi:10.1007 / s11095-009-0012-2. PMC  2831147. PMID  19998056.