Darbe kovalamaca analizi - Pulse-chase analysis

Darbe kovalamaca analizi Oksin sinyal iletimi Arabidopsis thaliana vahşi tip ve bir axr2-1 mutantı. Yabani tip ve axr2-1 fidanları 35S- ile etiketlendimetiyonin ve AXR2 / axr2-1 proteini immünopresipite ya etiketleme döneminden hemen sonra (t = 0) ya da etiketlenmemiş metiyonin ile 15 dakikalık bir kovalamacanın ardından (t = 15).

Biyokimya ve moleküler biyolojide, bir nabız takibi analizi Hücreleri etiketli bir bileşiğe (puls) ve ardından aynı bileşiğe etiketlenmemiş bir formda (kovalamaca) arka arkaya maruz bırakarak zaman içinde meydana gelen hücresel bir işlemi inceleme yöntemidir.[1]

Mekanizma

Seçilen bir hücre veya bir hücre grubu ilk önce, incelenen bir molekül veya sisteme dahil edilecek etiketli bir bileşiğe (darbe) maruz bırakılır (ayrıca bkz. darbe etiketleme ). Bileşik daha sonra metabolik yollardan geçer ve incelenen ürünün sentezinde kullanılır. Örneğin, radyoaktif olarak etiketlenmiş bir lösin (3H-lösin) bir grup pankreas beta hücreleri daha sonra bu amino asidi insülin sentez.

Etiketli bileşiğin uygulanmasından kısa bir süre sonra (genellikle yaklaşık 5 dakika, ancak gereken gerçek süre çalışılan nesneye bağlıdır), aynı, ancak etiketlenmemiş maddenin fazlası (takip sırası) çevreye verilir. Önceki örneği takiben, üretim insülin devam edecekti, ancak artık radyoaktif içermeyecekti lösin nabız fazında eklenir ve radyoaktif algılama yöntemleri kullanılarak görülmez. Bununla birlikte, nabız periyodu sırasında üretilen etiketli insülinin hareketi, hücre içinde hala izlenebilir.[2]

Kullanımlar

Bu yöntem, belirli hücrelerin uzun bir süre boyunca aktivitesini belirlemek için kullanışlıdır. Yöntem çalışmak için kullanıldı protein kinaz C, Ubikitin ve diğer birçok protein. Yöntem aynı zamanda varlığını ve işlevini kanıtlamak için de kullanıldı Okazaki parçaları. George Palade aydınlatmak için radyoaktif amino asitlerin nabız takibini kullandı salgı yolu.[3][4]

Referanslar

  1. ^ Takahashi M, Ono Y (2003). "Protein kinaz C'nin darbe kovalayıcı analizi". Yöntemler Mol. Biol. 233: 163–70. doi:10.1385/1-59259-397-6:163. ISBN  978-1-59259-397-2. PMID  12840506.
  2. ^ Ferguson PL, Coombs DH (Mart 2000). "Bakteriyofaj T4 kuyruğunun in vivo montajının nabız takibi analizi". J. Mol. Biol. 297 (1): 99–117. doi:10.1006 / jmbi.2000.3551. PMID  10704310.
  3. ^ Hoyt MA, Zich J, Takeuchi J, Zhang M, Govaerts C, Coffino P (Nisan 2006). "Glisin-alanin tekrarları, proteazom tarafından uygun substratın açılmasına zarar verir". EMBO J. 25 (8): 1720–9. doi:10.1038 / sj.emboj.7601058. PMC  1440830. PMID  16601692. Şekiller ve tablolar - Pulse-Chase Analizini gösterir
  4. ^ Alberts, B. (Mart 2002). Hücrenin Moleküler Biyolojisi, Dördüncü Baskı. ISBN  978-0-8153-3218-3.