CGAS – STING sitosolik DNA algılama yolu - CGAS–STING cytosolic DNA sensing pathway

cGAS – STING yolu bir bileşenidir doğuştan bağışıklık sistemi varlığını tespit etme işlevi gören sitozolik DNA ve yanıt olarak, inflamatuar genlerin ekspresyonunu tetikleyerek yaşlanma[1] veya savunma mekanizmalarının aktivasyonu. DNA normalde çekirdek hücrenin. DNA'nın yerelleştirilmesi sitozol ile ilişkili tümörijenez, viral enfeksiyon ve bazı hücre içi bakterilerin istilası.[2] CGAS - STING yolu, sitozolik DNA'yı tespit etmek ve bir bağışıklık tepkisi oluşturmak için hareket eder.

DNA bağlandıktan sonra, protein döngüsel GMP-AMP Sentaz (cGAS ), döngüsel GMP-AMP (cGAMP) oluşturmak için GTP ve ATP'nin reaksiyonunu tetikler. cGAMP, İnterferon Genlerinin Stimülatörüne bağlanır (STING ) hangi tetikler fosforilasyon nın-nin IRF3 üzerinden TBK1. IRF3 daha sonra tetiklemek için çekirdeğe gidebilir transkripsiyon iltihaplı genlerin. Bu yol, çift sarmallı DNA'ya karşı bağışıklık savunmasına aracılık etmede kritik bir rol oynar. virüsler.

Doğuştan gelen bağışıklık sistemi dayanır germ hattı kodlanmış Model tanıma reseptörleri (PRR'ler) farklı patojenle ilişkili moleküler modeller (PAMP'ler). Bir PAMP'ın tanınması üzerine, PRR'ler, bağışıklık tepkisi ile ilişkili genlerin transkripsiyonuna yol açan sinyal kademeleri üretir. Çünkü tüm patojenler kullanır nükleik asit yaymak, DNA ve RNA PRR'ler tarafından bağışıklık aktivasyonunu tetiklemek için tanınabilir. Normal hücrelerde DNA, çekirdek veya mitokondri. Sitozolde DNA varlığı, hücresel hasar veya enfeksiyonun göstergesidir ve bağışıklık tepkisi ile bağlantılı genlerin aktivasyonuna yol açar. Sitozolik DNA'nın algılanmasının bir yolu, cGAS / STING yolu, özellikle de siklik-GMP-AMP sentaz (cGAS) yoluyla algılanır. DNA'nın tanınması üzerine cGAS, siklik-GMP-AMP (cGAMP) oluşumunu dimerize eder ve uyarır. cGAMP daha sonra, TBK1 aracılığıyla IRF3 transkripsiyon faktörünün fosforilasyonunu / aktivasyonunu tetikleyen interferon genlerinin (STING) uyarıcısına doğrudan bağlanır. IRF3, iltihaplı genlerin transkripsiyonunu desteklemek için çekirdeğe girebilir, örneğin IFN-β.

Döngüsel GMP-AMP sentaz (cGAS)

Yapısı

cGAS bir 522 amino asit protein ve bir üyesi nükleotidiltransferaz aile. DsDNA'yı bağlamak için N-terminal kalıntıları 1-212 gereklidir. Bu bölge, iki farklı DNA bağlanma alanı içerebilir. C-terminal kalıntıları 213-522, nükleotidiltransferaz (NTase) motifinin bir kısmını ve bir Mab21 alanı içerir ve zebra balıklarından insanlara kadar cGAS'da yüksek oranda korunur. Bu bölgeler, cGAS substratları için katalitik cebi oluşturmak için gereklidir: GTP ve ATP ve gerekli siklizasyon reaksiyonunu gerçekleştirmek.[3][4][5]

Fonksiyon

cGAS, plazma zarında bulunur[6] ve IFN-y üretimini uyarmak için normalde hücre çekirdeğinde bulunan sitozolik çift sarmallı DNA'yı tespit etmekten sorumludur. Doğrudan sitozolik DNA'yı bağladıktan sonra, cGAS, üretimini katalize etmek için dimerler oluşturur. 2’3’-cGAMP ATP ve GTP'den. cGAMP daha sonra IRF3 transkripsiyon faktörünün aktivasyonunu tetiklemek için STING'e bağlanan ikinci bir haberci görevi görür. IRF3, tip-1 IFN-y'nin transkripsiyonuna yol açar. cGAS, RNA varlığında 2’3'-cGAMP üretemez.

Keşif

CGAS'ın keşfinden önce, interferon betanın sitosolik dsDNA varlığında üretildiği ve STING'den yoksun hücrelerin dsDNA varlığında interferon üretemediği biliniyordu. Hücre özütlerinin biyokimyasal fraksiyonasyonu ve kantitatif kütle spektrometrisi yoluyla, Sun, et al.[7] cGAS'ı, ikinci haberci 2'3'-cGAMP sentezleyerek interferon betayı tetikleyebilen DNA algılayıcı protein olarak tanımladı. Bu aktivite sitozolik DNA'ya bağlıdır.

Enzimatik aktivite

cGAS, dsDNA varlığında cGAMP oluşumunu katalize eder. cGAS, negatif yüklü DNA fosfat omurgası ile etkileşime giren pozitif yüklü amino asit kalıntıları aracılığıyla dsDNA'yı doğrudan bağlar. Pozitif yüklü kalıntılardaki mutasyonlar, DNA bağlanmasını ve ardından STING aracılığıyla interferon üretimini tamamen ortadan kaldırır. DsDNA'yı bağladıktan sonra, cGAS dimerleşir ve katalitik bir nükleotid bağlanma cebi açan konformasyonel değişikliklere uğrar. GTP ve ATP girmek. Burada, siklik dinükleotid cGAMP üretmek üzere fosfodiester bağı oluşumunu katalize etmek için baz istifleme, hidrojen bağları ve iki değerlikli katyonlar yoluyla stabilize edilirler.

Döngüsel GMP-AMP (cGAMP)

Ana makale: Döngüsel GMP-AMP sentazı

Yapısı

Siklik GMP-AMP (cGAMP), bir siklik dinükleotiddir (CDN) ve metazoanlarda bulunan ilk maddedir. Diğer CDN'ler (c-di-GMP ve c-di-AMP) genellikle bakteriler, arkeler ve protozoalarda bulunur. Adından da anlaşılacağı gibi, cGAMP, iki fosfodiester bağı ile bağlanan bir Adenin monofosfat (AMP) ve bir Guanin monofosfattan (GMP) oluşan siklik bir moleküldür. Bununla birlikte, cGAMP, GMP'nin 2 ’OH'si ile AMP'nin 5’ fosfatı arasında benzersiz bir fosfodiester bağları içermesi bakımından diğer CDN'lerden farklıdır.[8] Diğer bağ AMP'nin 3 ’OH'si ile GMP'nin 5’ fosfatı arasındadır. Benzersiz 2'-5 ’fosfodiester bağı, 3’-5’ fosfodiesterazların neden olduğu bozunmaya daha az duyarlı olduğu için avantajlı olabilir. Benzersiz 2'-5 'bağlantısının diğer avantajları, cGAMP'ın insan popülasyonunda bulunan STING'in birden fazla allelik varyantını bağlayabilmesi, ancak yalnızca 3'-5' bağlantılarından oluşan diğer CDN'lerin bağlanmaması olabilir.

cGAS, dsDNA'ya bağlanmıştır. PDB 4O6A'dan uyarlanmıştır.[9]

Keşif

cGAMP, James Chen ve meslektaşları tarafından keşfedildi[10] hücrelerden sitoplazmik özler toplayarak transfekte farklı DNA türleri ile. Hücresel özütler, aktifleştirilmiş IRF3 dimerlerinin saptanmasıyla STING aktivasyonu için deneye tabi tutuldu. Kullanma afinite saflaştırma kromatografisi STING aktifleştirici madde saflaştırıldı ve maddenin siklik-GMP-AMP (cGAMP) olarak belirlenmesi için kütle spektrometresi kullanıldı.

Kimyasal olarak sentezlenen cGAMP'ın IRF3 aktivasyonunu ve IFN-y üretimini tetiklediği gösterilmiştir. cGAMP'ın diğer siklik di-nükleotidlerden (c-di-GMP ve c-di-AMP) çok daha güçlü olduğu bulundu. cGAMP'ın radyo etiketli cGAMP kullanılarak STING'i kesin olarak bağladığı gösterilmiştir. çapraz bağlı STING'e. Etiketlenmemiş cGAMP, c-di-GMP veya c-di-AMP'nin eklenmesinin radyo etiketli cGAMP ile rekabet ettiği bulundu, bu da CDN bağlanma alanlarının örtüştüğünü düşündürdü. Daha sonra, cGAMP'ın geleneksel 3'-5 'bağlantılı CDN'lerden farklı olan benzersiz bir 2'-5 ’fosfodiester bağına sahip olduğu ve bu bağın cGAMP'ın bazı benzersiz sinyalleme özelliklerini açıklayabileceği gösterildi.[8]

İnterferon Genlerinin Stimülatörü (STING)

Ana makale: İnterferon Genlerinin Stimülatörü

STING bir endoplazmik retikulum yerleşik proteindir ve çeşitli farklı siklik-di-nükleotidlere doğrudan bağlandığı gösterilmiştir.[8]

İfade

STING, hem immün hem de immün olmayan kökenli çok sayıda doku tipinde geniş olarak ifade edilir.[11] STING, murin embriyonik fibroblastlarda tanımlanmıştır ve tip 1 interferon hem immün hem de immün olmayan hücrelerde yanıt.[12]

Yapısı

STING, 378 amino asitli bir proteindir. N-terminal bölgesi (1-154 kalıntıları) dört trans-membran alanı içerir. C-terminal alanı, dimerizasyon alanını, siklik dinükleotit etkileşim alanını ve ayrıca TBK1 ile etkileşime girmekten ve aktive etmekten sorumlu bir alan içerir. 2'-3 ’cGAMP'ın bağlanması üzerine STING, cGAMP'yi çevreleyen önemli bir konformasyonel değişikliğe (yaklaşık 20 Angstrom içe doğru dönüş) uğrar.

STING, cGAMP'a bağlı. STING bir homodimer olarak mevcutken, yan zincir kalıntılarının cGAMP ile etkileşimini vurgulamak için sadece bir alt birim gösterilmiştir. PDB 4KSY'den uyarlanmıştır [13]

Fonksiyon

2'-3 ’cGAMP'ın (ve diğer bakteriyel CDN'lerin) bağlanması üzerine STING, tip 1 IFN yanıtını indükleyen aşağı akış transkripsiyon faktörleri IRF3'ü fosforile etmek için TBK1'i aktive eder ve STAT6 neden olan kemokinler gibi CCL2 ve CCL20 IRF3'ten bağımsız olarak.[14] STING'in ayrıca NF-κB transkripsiyon faktörü faaliyeti aracılığıyla IκB kinaz (IKK), STING'in aşağı akışında NF-κB aktivasyon mekanizması belirlenecek olsa da. STING tarafından aktive edilen sinyal yolakları, sitozolde ektopik DNA'ya sahip hücrelere doğal bir bağışıklık tepkisi oluşturmak için birleşir. STING aktivitesinin kaybı, fare embriyonik fibroblastları belirli virüslerin neden olduğu enfeksiyona karşı savaşmak ve daha genel olarak, sokulan sitozolik DNA'ya tip 1 IFN yanıtı için gereklidir.[12]

Hücre tipleri arasında sitozolik DNA-tip 1 IFN yanıtında bir adaptör molekülü olarak STING'in genel rolünün, dentritik hücreler (DC'ler). DC'ler, doğuştan gelen bağışıklık sistemini adaptif bağışıklık sistemine bağlar. fagositoz ve MHC yabancı antijenin sunumu. DC'ler tarafından başlatılan tip 1 IFN yanıtı, muhtemelen fagositozlu DNA'nın tanınması yoluyla,[15] önemli bir ortak uyarıcı etkiye sahiptir. Bu, son zamanlarda, 2'-3 ’cGAMP'ın, bağışıklık tepkilerini indüklemek için DNA'dan daha etkili ve doğrudan bir adjuvan olarak kullanılabileceğine dair spekülasyonlara yol açtı.

Alelik Varyasyon

İnsan STING'inde (hSTING) doğal olarak oluşan varyasyonlar 232 amino asit pozisyonunda (R232 ve H232) bulunmuştur. H232 varyantlarında tip 1 IFN yanıtları azalmıştır[16] ve bu pozisyonda alanine mutasyon, bakteriyel CDN'lere yanıtı ortadan kaldırır. Ligand bağlanmasını artıran ikameler de bulundu. G230A ikamelerinin, c-di-GMP bağlanması üzerine hSTING sinyalini arttırdığı gösterilmiştir. Bu kalıntı, bağlama cebinin kapağında bulunur ve muhtemelen c-di-GMP bağlanma kabiliyetini arttırır.[17]

CGAS-STING yolunun biyolojik önemi

Viral yanıtta rol

CGAS-cGAMP-STING yolu, sitozolik DNA'ya yanıt olarak interferon beta üretebilir. HSV-1 gibi DNA virüslerinin cGAMP üretimini ve ardından interferon betanın STING yoluyla aktivasyonunu tetikleyebildiği gösterilmiştir. RNA virüsleri, örneğin VSV veya Sendai virüsü, interferonu cGAS-STING aracılığıyla tetikleyemez. cGAS veya STING kusurlu fareler, nihayetinde ölüme yol açan HSV-1 enfeksiyonuna yanıt olarak interferon üretemezken, normal cGAS ve STING işlevine sahip fareler iyileşebilir.

Retrovirüsler, örneğin HIV-1, IFN'yi cGAS / STING yolu üzerinden aktive ettiği de gösterilmiştir. Bu çalışmalarda, retroviral ters transkripsiyon inhibitörleri, IFN üretimini iptal ederek, cGAS'ı aktive eden viral cDNA olduğunu düşündürdü.[18]

Tümör sürveyansındaki rolü

CGAS / STING yolu da tümör sürveyansında bir role sahiptir. DNA hasarı gibi hücresel strese yanıt olarak, hücreler yukarı doğru düzenlenir NKG2D ligandlar tarafından tanınabilir ve yok edilebilirler Doğal Katil (NK) ve T hücreleri. Birçok tümör hücresinde, DNA hasarı tepkisi yapısal olarak aktiftir ve sitoplazmik DNA birikimine yol açar. Bu, IRF3'ün aktivasyonuna yol açan cGAS / STING yolunu etkinleştirir. Lenfoma hücrelerinde NKG2D ligandı Rae1'in STING / IRF3'e bağımlı bir şekilde yukarı regüle edildiği gösterilmiştir. DNA'nın bu hücrelere transfeksiyonu, STING'e bağlı olan Rae1 ekspresyonunu da tetikledi. Bu modelde, transkripsiyon faktörü IRF3, cGAS / STING aracılığıyla, NK aracılı tümör temizlenmesine yardımcı olmak için tümör hücrelerinde Rae1 gibi stresle indüklenen ligandları yukarı düzenler. [19]

Otoimmün hastalıktaki rolü

Viral enfeksiyona bağlı sitoplazmik DNA, enfeksiyonun temizlenmesine yardımcı olmak için interferon betanın aktivasyonuna yol açabilir. Bununla birlikte, sitozoldeki konakçı DNA nedeniyle STING'in kronik aktivasyonu, otoimmün bozukluklara yol açacak şekilde cGAS / STING yolunu da aktive edebilir. Bunun bir örneği şu şekildedir: Aicardi-Goutières sendromu (AGS). 3 'onarım eksonükleazındaki (TREX1) mutasyonlar, sitozolde endojen retroelementlerin birikmesine neden olur ve bu da cGAS / STING aktivasyonuna yol açarak IFN üretimine neden olabilir. Aşırı IFN üretimi, aşırı aktif bir bağışıklık sistemine yol açarak AGS ve diğer bağışıklık bozukluklarına neden olur. Farelerde, TREX1 eksikliği ile ilişkili otoimmün semptomların cGAS, STING veya IRF3 knockout ile giderildiği bulundu, bu da otoimmün bozukluklarda anormal DNA algılamanın önemini ima eder.[18]

Hücresel yaşlanmadaki rolü

Fare embriyonik fibroblastlarında ve birincil insan fibroblastlarında cGAS ve STING'in tükenmesinin yaşlanmayı ve SASP'yi önlediği gösterilmiştir (yaşlanma ile ilişkili salgı fenotipi ) kuruluş.[20][1]

Terapötik rol

DNA'nın, aşılar tarafından kodlanan antijenlere karşı bağışıklık tepkisini artırmak için güçlü bir yardımcı madde olduğu gösterilmiştir. cGAMP, STING'in IRF3 aktivasyonu yoluyla, interferonun transkripsiyonunu uyarır. Bu, cGAMP'ı enflamatuar tepkileri artırabilen potansiyel bir aşı adjuvanı yapar.[8] Çalışmalar, tavuk antijeni ile kodlanan aşıların, ovalbümin (OVA), cGAMP ile bağlantılı olarak, antijene özgü T ve B hücrelerini in vivo STING'e bağlı bir şekilde etkinleştirebildi. OVA peptidi ile uyarıldığında, OVA + cGAMP ile aşılanmış farelerden alınan T hücrelerinin yüksek IFN-g ve IL-2 sadece OVA alan hayvanlarla karşılaştırıldığında.[21] Ayrıca, benzersiz 2'-5 ’fosfodiester bağına bağlı olarak cGAMP'ın gelişmiş stabilitesi, onu in vivo uygulamalar için DNA'ya tercih edilen bir adjuvan haline getirebilir.

Referanslar

  1. ^ a b Yang H, Wang H, Ren J, Chen Q, Chen ZJ (Haziran 2017). "cGAS, hücresel yaşlanma için gereklidir". Amerika Birleşik Devletleri Ulusal Bilimler Akademisi Bildirileri. 114 (23): E4612 – E4620. doi:10.1073 / pnas.1705499114. PMC  5468617. PMID  28533362.
  2. ^ Watson RO, Bell SL, MacDuff DA, Kimmey JM, Diner EJ, Olivas J, vd. (Haziran 2015). "Sitosolik Sensör cGAS, Tip I İnterferonları İndüklemek ve Otofajiyi Etkinleştirmek için Mycobacterium tuberculosis DNA'sını Algılar". Hücre Konakçı ve Mikrop. 17 (6): 811–819. doi:10.1016 / j.chom.2015.05.004. PMC  4466081. PMID  26048136.
  3. ^ Ablasser A, Schmid-Burgk JL, Hemmerling I, Horvath GL, Schmidt T, Latz E, Hornung V (Kasım 2013). "Hücre iç bağışıklığı, cGAMP'nin hücreler arası transferi yoluyla çevredeki hücrelere yayılır". Doğa. 503 (7477): 530–4. Bibcode:2013Natur.503..530A. doi:10.1038 / nature12640. PMC  4142317. PMID  24077100.
  4. ^ Li Y, Lu J, Han Y, Fan X, Ding SW (Ekim 2013). "RNA interferansı, memelilerde antiviral bir bağışıklık mekanizması olarak işlev görür". Bilim. 342 (6155): 231–4. Bibcode:2013Sci ... 342..231L. doi:10.1126 / science.1241911. PMC  3875315. PMID  24115437.
  5. ^ Kranzusch PJ, Vance RE (Aralık 2013). "cGAS dimerizasyonu DNA tanımayı karıştırır". Bağışıklık. 39 (6): 992–4. doi:10.1016 / j.immuni.2013.11.012. PMID  24332024.
  6. ^ Barnett KC, Coronas-Serna JM, Zhou W, Ernandes MJ, Cao A, Kranzusch PJ, Kagan JC (Mart 2019). "Fosfoinositid Etkileşimleri cGAS'ı Plazma Zarına Konumlandırarak Kendi Kendine ve Viral DNA Arasında Etkin Ayırım Sağlayın". Hücre. 176 (6): 1432–1446.e11. doi:10.1016 / j.cell.2019.01.049. PMC  6697112. PMID  30827685.
  7. ^ Sun L, Wu J, Du F, Chen X, Chen ZJ (Şubat 2013). "Döngüsel GMP-AMP sentaz, tip I interferon yolunu etkinleştiren bir sitozolik DNA sensörüdür". Bilim. 339 (6121): 786–91. Bibcode:2013Sci ... 339..786S. doi:10.1126 / science.1232458. PMC  3863629. PMID  23258413.
  8. ^ a b c d Diner EJ, Burdette DL, Wilson SC, Monroe KM, Kellenberger CA, Hyodo M, vd. (Mayıs 2013). "Doğuştan gelen bağışıklık DNA sensörü cGAS, insan STING'i aktive eden kanonik olmayan bir siklik dinükleotid üretir". Hücre Raporları. 3 (5): 1355–61. doi:10.1016 / j.celrep.2013.05.009. PMC  3706192. PMID  23707065.
  9. ^ PDB: 4O6A​
  10. ^ Wu J, Sun L, Chen X, Du F, Shi H, Chen C, Chen ZJ (Şubat 2013). "Döngüsel GMP-AMP, sitozolik DNA tarafından doğuştan gelen bağışıklık sinyallemesinde endojen bir ikinci haberci". Bilim. 339 (6121): 826–30. Bibcode:2013Sci ... 339..826W. doi:10.1126 / science.1229963. PMC  3855410. PMID  23258412.
  11. ^ "TMEM173 İfadesi". Gen Kartları.
  12. ^ a b Ishikawa H, Ma Z, Barber GN (Ekim 2009). "STING hücre içi DNA aracılı, tip I interferona bağlı doğuştan bağışıklığı düzenler". Doğa. 461 (7265): 788–92. Bibcode:2009Natur.461..788I. doi:10.1038 / nature08476. PMC  4664154. PMID  19776740.
  13. ^ PDB: 4KSY​
  14. ^ Burdette DL, Monroe KM, Sotelo-Troha K, Iwig JS, Eckert B, Hyodo M, vd. (Eylül 2011). "STING, döngüsel di-GMP'nin doğrudan doğuştan gelen bir bağışıklık sensörüdür". Doğa. 478 (7370): 515–8. Bibcode:2011Natur.478..515B. doi:10.1038 / nature10429. PMC  3203314. PMID  21947006.
  15. ^ Woo SR, Fuertes MB, Corrales L, Spranger S, Furdyna MJ, Leung MY, ve diğerleri. (Kasım 2014). "STING'e bağlı sitozolik DNA algılama, immünojenik tümörlerin doğuştan gelen immün tanımasına aracılık eder". Bağışıklık. 41 (5): 830–42. doi:10.1016 / j.immuni.2014.10.017. PMC  4384884. PMID  25517615.
  16. ^ Cai X, Chiu YH, Chen ZJ (Nisan 2014). "Sitozolik DNA algılama ve sinyallemenin cGAS-cGAMP-STING yolu". Moleküler Hücre. 54 (2): 289–96. doi:10.1016 / j.molcel.2014.03.040. PMID  24766893.
  17. ^ Yi G, Brendel VP, Shu C, Li P, Palanathan S, Cheng Kao C (2013). "İnsan STING'in tek nükleotid polimorfizmleri, siklik dinükleotidlere karşı doğal bağışıklık tepkisini etkileyebilir". PLOS ONE. 8 (10): e77846. Bibcode:2013PLoSO ... 877846Y. doi:10.1371 / journal.pone.0077846. PMC  3804601. PMID  24204993.
  18. ^ a b Gao D, Wu J, Wu YT, Du F, Aroh C, Yan N, ve diğerleri. (Ağustos 2013). "Döngüsel GMP-AMP sentaz, HIV ve diğer retrovirüslerin doğuştan gelen bir bağışıklık sensörüdür". Bilim. 341 (6148): 903–6. Bibcode:2013Sci ... 341..903G. doi:10.1126 / science.1240933. PMC  3860819. PMID  23929945.
  19. ^ Lam AR, Bert NL, Ho SS, Shen YJ, Tang LF, Xiong GM, ve diğerleri. (Nisan 2014). "NKG2D reseptörü için RAE1 ligandları, lenfomada STING'e bağlı DNA sensör yolları tarafından düzenlenir". Kanser araştırması. 74 (8): 2193–2203. doi:10.1158 / 0008-5472.CAN-13-1703. PMC  4229084. PMID  24590060.
  20. ^ Glück S, Guey B, Gulen MF, Wolter K, Kang TW, Schmacke NA, ve diğerleri. (Eylül 2017). "CGAS yoluyla sitozolik kromatin parçalarının doğuştan gelen bağışıklık algılaması yaşlanmayı teşvik eder". Doğa Hücre Biyolojisi. 19 (9): 1061–1070. doi:10.1038 / ncb3586. PMC  5826565. PMID  28759028.
  21. ^ Li XD, Wu J, Gao D, Wang H, Sun L, Chen ZJ (Eylül 2013). "CGAS-cGAMP sinyallemesinin antiviral savunma ve immün adjuvan etkilerinde önemli rolleri". Bilim. 341 (6152): 1390–4. Bibcode:2013Sci ... 341.1390L. doi:10.1126 / science.1244040. PMC  3863637. PMID  23989956.